Claude Mallet

目的

利用超灵敏UPLC^®-MS/MS对肌肉组织中的低浓度保泰松进行快速检测和定量。

背景

近来调查结果显示，在欧洲的牛肉制品中发现未经申报的马肉，这一事件的发生迫切要求相关企业和监管机构对肉类和肉制品中存在的马肉组织和残留的非甾体抗炎药（NSAID）保泰松（PBZ）进行分析检测。保泰松是一种兽药，在一些欧盟成员国，这种药用于为非食品用途的动物（狗和马）缓解疼痛和减轻炎症。但是，这种药物被规定不得用于治疗参与人类食物链的动物。因此，任何动物源性食品中存在此物质通常是由于非法使用经过治疗的马尸体所导致的。

采用超灵敏的UPLC-MS/MS方法以确保检测出低浓度的受污染产品。

解决方案

本研究引用了一种已报道的从肌肉组织中提取保泰松的方法¹，并对该方法做了较小调整。简单来讲，即取肉匀浆2 g，加入乙*10 mL，振摇2 min。离心后，收集上清液并用水进行稀释。使用沃特世（Waters^®） Oasis^® HLB 60 mg，将第一步所得的稀释提取物进行固相萃取(SPE)。用甲醇洗脱保泰松，然后用含10 mM甲酸铵(pH 3.2)的水进行稀释。在进行固相提取及上样之前，对提取物分别进行稀释，这样，无需进行蒸发和复溶操作。取100 μL稀释上样液，注入LC-MS/MS系统进行分析。

选择并优化了两个多重反应监测（MRM）离子对（定量和确证）对保泰松进行分析。所得结果已添加到Quanpedia^TM数据库以便将来使用。在本应用中，色谱分析采用2.1×100 mm HSS T3分析型色谱柱(1.7μm)，以甲醇/水（10mM甲酸铵，pH 3.2)进行梯度洗脱，梯度时间为5 min。图1显示了200 ng/kg保泰松加标提取物的MRM色谱图。如图1所示，保泰松和内标（100 ng/kg）的信噪比高，峰形良好。校正回收率后的工作标准曲线如图2所示，制备基质加标样品两份，并进行提取，建立六点校准曲线。根据线性回归，计算校准曲线（1/x²加权），以保泰松-二苯基¹³C₁₂作为内标。由结果数据可知，可轻松达到最低校准点(10 ng/kg)，比欧盟建议的浓度（RC)5μg/kg低500倍。在整个检测浓度范围内（10-500ng/kg），线性良好（R² 0.997）。在处理肉制品的过程中，马肉可能以其它途径掺入其中，保泰松浓度水平可能远低于EU RC，因此检测灵敏度是一个重要的考虑因素。

总结

ACQUITY UPLC^®I-Class系统与Xevo^®TQ-S联用，并结合Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱可对肉中浓度低至10  ng/ kg的保泰松进行分析。即使对于浓度可能很低的经混合和经处理的肉制品，这种超灵敏的UPLC-MS/MS技术仍能确保成功检出受污染产品。

参考文献

1. N. Van Hoof, K. De Wasch, S. Poelmans, H. Noppe and H. De Brabander Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004; 18: 2823–2829