AAV、VSV和 LV在猕猴上的应用-null-资讯-生物在线

AAV、VSV和 LV在猕猴上的应用

作者:武汉枢密脑科学技术有限公司 2022-06-13T15:13 (访问量:1370)


       上篇推文小编给大家解读了2022年5月20日发表于elife杂志的客户文章,本文将具体侧重介绍腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)、水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)和慢病毒(Lentivirus,LV)在猕猴上表达的效果,三者之间的差异比较,以及AAV注射相关问题。

一、表达效果
病毒类型:AAV(腺相关病毒)
注射脑区:丘脑(MD),皮层(Cortex),腹外侧前额叶皮层(vlPFC)
表达天数:45天,75/110天
表达情况:神经元胞体标记良好,神经轴突纤维标记良好。

病毒类型:VSV(水泡性口炎病毒)
注射脑区:丘脑(MD),皮层(Cortex)
表达天数:5天,30天
表达情况:胞体标记良好,近端神经突标记,无长程轴突纤维标记(5天);轴突丢失、神经元死亡(30天)。


病毒类型:LV(慢病毒)
注射脑区:丘脑(MD),皮层(Cortex)
表达天数:260天
表达情况:胞体标记良好,无长程轴突纤维标记。


二、三种病毒的表达比较

       小结:AAV良好标记神经元胞体以及纤维;VSV良好标记神经元胞体和近端纤维,不标记远端轴突,且随着时间的发展发生细胞死亡;LV良好标记胞体,不标记轴突。

三、表达特异性
       如下图所示,AAV2/9-CaMKIIα-Tau-GFP 带有兴奋性神经元特异性启动子,并通过GFP标记感染细胞。作者通过免疫荧光染色,检测GFP与神经元标志物NeuN和星型胶质细胞标志物GFAP的共标情况,可以看到病毒特异性标记神经元细胞



四、安全性
       在本实验中,研究人员在食蟹猴脑注射病毒后,在AAV表达时长长达110天后进行实验(且无报道异常),说明感染AAV后猴可以存活至少110天。

       M:雄性;F:雌性;MD:内侧丘脑;vlPFC:腹外侧前额叶;UbC:人泛素C;hSyn:人突触蛋白I;CaMKII:钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II;d:天

五、滴度、剂量


       本实验中AAV来源于枢密科技,病毒滴度高达8.47x1013vg/mL,表达时间长,安全性高,特异性标记神经元细胞。位点注射剂量10-20μL
       病毒注射: 注射速度从200纳升/分钟开始,增加到400纳升/分钟;总注射量为10-20微升。





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