产品信息

产品描述

Hieff NGS^® 96 Single Index Primers Kit for Illumina^®是Illumina高通量测序平台文库构建专用试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含48种Index Primer。本试剂盒提供了二代测序建库中使用的adapter和单端96种Index Primer，适用于Illumina®高通量测序平台多样品DNA文库构建。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存，有效期1年。

注意事项

1. 本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2. 本试剂盒提供的DNA Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

3. 本试剂盒每个Set包含48种Index Primer，每种Index Primer可以构建2个DNA文库，每个Set可以构建96个DNA文库。

4. 切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。

5. 使用Hieff NGS^® 96 Single Index Primers Kit for Illumina^®试剂盒构建的DNA文库结构如下：

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^® 试剂盒操作说明进行。

接头连接（Adapter Ligation）：

在末端修复产物两端连接特定的Illumina^®接头，即Hieff NGS^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®操作步骤3.2。

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量；

表1. 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度（bp）]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

3. 配制表2所示反应体系；

表2. Adapter Ligation反应体系

【注】：*Ligation Enhancer比较粘稠，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）与常规商业化试剂盒一致，皆为15 μmol/L。请根据注意事项三中的提示，计算接头用量。

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

5. 将PCR管置于PCR仪中，设置表3所示反应程序，进行接头连接反应：

表3. Adapter Ligation反应程序

【注】：当Input DNA量较低，实验效果不理想时，可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化（Post Ligation Clean Up）

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物，分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要，详细操作步骤参照Hieff NGS^® MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina^®建库试剂盒说明书。

文库扩增（Library Amplification）

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集，使用本试剂盒接头时，该步骤为必做步骤；

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用；

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系；

表4. PCR扩增反应体系

【注】：文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒（Cat#12611；Cat#12612；Cat#12613；Cat#12614）。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液收集至管底；

4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表5所示反应程序，进行PCR扩增。

表5. PCR扩增反应程序